Гистологиядағы зерттеу әдістері. Микроскопияға арналған препараттарды дайындау. Жасушалар мен ұлпаларды зерттеудің зертханалық әдістері Гистология мен эмбриологияда қолданылатын әдістер

Ұлпалар мен жасушаларды зерттеудің заманауи әдістері физика, химия, биохимия, молекулалық биология, генетикалық инженерия. Бұл жаңа аспаптар мен технологияларды – микроскоптардың әртүрлі түрлерін, компьютерлік техниканы, рентгендік дифракциялық талдауды, авторрадиографияны, электрофорезді және хроматографияны, жасушаларды бөлу және өсіру, будандар мен гибридомаларды алу және т.б. арқасында мүмкін болды. Алайда, мұндай жағдайларға қарамастан алуан түрлі әдістер, гистология. Өзінің негізінде бұл морфологиялық ғылым, оның зерттеу объектілері тірі және қозғалмайтын жасушалар мен ұлпалар.

Жануарлардың құрылысын зерттеудің негізгі әдістері және өсімдік жасушаларыжәне ұлпалар жарық микроскопиясы болып табылады. Қазіргі жарық микроскоптары 0,2 мкм ретті ажыратымдылықты (екі нүктені бөлек бақылау мүмкіндігін) қамтамасыз етеді және максималды 2000-2500 есе үлкейтуді береді. Контраст үшін микрообъектілер фиксациядан кейін боялады. Бекіту зерттелетін объектінің интравитальді құрылымын бекітуге дейін қысқарады.

Бекіткіштерге формалин (5-20%), этил спирті, ось қышқылы жатады.

Бояу зерттеу мақсатына байланысты әртүрлі әдістермен жүзеге асырылады.

Жарық микроскопына фазалық контраст, флуоресценция, ультракүлгін, интерференция және қараңғы өріс микроскопиясы жатады.

Фазалық контрастты микроскопиямөлдір түссіз тірі объектілерді (жасушалар мен ұлпаларды) зерттеу үшін қолданылады. Бұл әдіс конденсаторға орналастырылған арнайы сақиналы диафрагма мен объективте орналасқан фазалық пластинаның арқасында зерттелетін боялмаған құрылымдардың контрастын қамтамасыз етеді. Нәтижесінде сыну көрсеткіші бойынша ерекшеленетін барлық құрылымдар ақ-қара суретте көрінеді.

Флуоресцентті (люминесцентті) микроскопия.Флуоресценция кезінде қысқа толқынды сәулелерді жұтатын бірқатар заттардың атомдары мен молекулалары қозған күйге өтеді. Қалыпты күйге кері өту жарық сәулеленуімен, бірақ толқын ұзындығының ұзағырақ болуымен жүреді.

Препарат ультракүлгін немесе күлгін және көк сәулелерде қарастырылады.

Өзіндік немесе бастапқы және индукциялық немесе қайталама флуоресценцияны ажыратыңыз. Жүйке, діңгек және басқа жасушалардың құрамындағы серотонин, катехоламиндер (адреналин, норадреналин) 60-80ºС формальдегид буында тіндік фиксациядан кейін алғашқы флуоресценцияға ие болады.

Екіншілік флуоресценцияны арнайы бояғыштар – фторхромдар (акрин-апельсин, родамин, фторцин және т.б.) тудырады. Мысалы, препараттарды акринді апельсинмен өңдегенде жасушадағы ДНҚ ашық жасыл, ал РНҚ ашық қызыл жарқылға ие болады.

ультракүлгін микроскопиятолқын ұзындығы шамамен 0,2 микрон болатын қысқа ультракүлгін сәулелерді қолдануға негізделген. Бұл жағдайда рұқсат етілген қашықтық - 0,1 мкм. Сурет фотопластинаға немесе флуоресцентті экранға жазылады.

Қараңғы өріс микроскопиясы. Препаратты қатаң көлбеу жарықпен жарықтандыратын арнайы конденсатор қолданылады; сәулелендіру құралының сәулелері бүйірден бағытталған. Бақыланатын нысан қараңғы өрісте жарықтандырылған болып көрінеді. Бұл әдіс тірі заттарды бақылау, зәрдегі кристалдарды зерттеу үшін қолданылады.

интерференциялық микроскопия.Тіндердің массасын анықтау үшін интерференциялық микроскоп, ал жасуша бетінің рельефін зерттеу үшін дифференциалды интерференциялық микроскоп (Номарский оптикасымен) қолданылады.

Интерференциялық микроскопта сəулелендіру құралының жарық шоғы екі ағынға бөлінеді: біреуі объект арқылы өтеді, екіншісі объектіні айналып өтеді. Объективті призмаларда екі сәуле де қосылып, бір-біріне кедергі жасайды. Бұл жағдайда әртүрлі қалыңдық пен тығыздықтағы микрообъектінің кесінділері контраст дәрежесі бойынша ерекшеленеді. Өзгерістерді сандық түрде анықтағаннан кейін концентрация мен құрғақ заттың массасы анықталады. Фазалық контрастты, интерференциялық және күңгірт-өрісті микроскопияның артықшылығы - жасушалардың қозғалысы мен бөліну процесінде (митоз, мейоз) бақылау мүмкіндігі.

Поляризациялық микроскопияекі поляризациялық сүзгі орнатылған жарық микроскопының модификациясы: біреуі (поляризатор) жарық сәулесі мен объекті арасында, екіншісі (анализатор) объективті линза мен көз арасында. Екі сүзгі де айнала алады, жарық сәулесінің бағытын өзгертеді.

Бұл жағдайда кейбір органикалық құрылымдардың әртүрлі оптикалық осьтер бойымен поляризацияланған жарықты әртүрлі жолмен сындыру қасиеті олардың молекулаларының ерекше бағдарлануынан (анизотропия) көрінеді. Мысалы, сүзгілердің айналу осі өзгерген кезде коллаген талшықтары мен миофибрилдері жарқыраған болып көрінеді.

Электрондық микроскопия.Электрондық микроскоп жарық микроскопына қарағанда толқын ұзындығы азырақ вакуумдағы электрондар ағынын пайдаланады. 50000В кернеуде толқын ұзындығы электромагниттік тербелістер 0,0056 нм-ге тең.

Бұл шарттарда шешілетін қашықтық 0,002 нм болуы мүмкін деп теориялық есептелген, яғни. Жарық микроскопына қарағанда 100 000 есе аз. Бірақ іс жүзінде ол 0,1-0,7 нм. Қазіргі уақытта гистологиялық зерттеулерде трансмиссиялық (трансмиссиялық) электронды микроскоптар (ТЭМ) және сканерлеуші ​​(сканерлеуші) электронды микроскоптар (SEM) қолданылады. Трансмиссиялық электронды микроскоптар зерттелетін микрообъектінің тек жазық бейнесін алуға мүмкіндік береді, ал сканерлеуші ​​электрондық микроскоптар үш өлшемді кескінді жасауға қабілетті, яғни. беттің жеке нүктелерін электронды сәулемен дәйекті түрде зондтау.

Алынған кескін теледидар экранында көрсетіледі, оның электронды сәулесі микрозондпен синхронды түрде қозғалады.

Мембраналардың және жасушааралық контактілердің құрылымының егжей-тегжейлерін зерттеу үшін мұздату - чиптеу (-160ºС) әдісі қолданылады. Жасуша жарғақшаларының сыртқы бетін зерттеу үшін электронды микроскопияның «мұздату» әдісі – офорт қолданылады. Мұздағаннан кейін блок мұз кристалдарымен ыдырайды, вакуумда суды сублимациялау арқылы жойылады. Содан кейін жасушаларға ауыр металдың жұқа қабығы (мысалы, платина) шашылады.

Мұздату әдістері бекітілмеген жасушаларды оларда фиксатор тудырған артефактілер түзілмей зерттеуге мүмкіндік береді.

Өте жоғары кернеулі микроскопия. 3 000 000 В-қа дейінгі үдеткіш кернеуі бар электронды микроскоптар үлкен қалыңдықтағы (1-10 мкм) объектілерді зерттеуге мүмкіндік береді.

Макромолекулалардың құрылымын атомдық деңгейде зерттеу үшін толқын ұзындығы шамамен 0,1 нм (сутегі атомының диаметрі) рентген сәулелерін қолданатын әдістер қолданылады.

Гистологиялық зерттеу әдістері

қалыпты, патологиялық және тәжірибелік жағдайларда адамның, жануарлардың және өсімдіктердің жасушалары мен ұлпаларының құрылысы мен қызметін зерттеу үшін қолданылады. Г.м негізі және. болып табылады - жасушалар мен ұлпаларды микроскопиялық зерттеу үшін препараттарды өндіруде қолданылатын әдістемелік әдістердің жиынтығы. Жасушалар мен ұлпаларды микроскопиялық зерттеу зерттелетін объектінің жағдайына байланысты екі негізгі әдіспен жүзеге асырылуы мүмкін: тірі жасушалар мен ұлпаларды зерттеу, арнайы фиксацияға байланысты құрылымын сақтайтын тірі емес жасушалар мен ұлпаларды зерттеу. әдістер.

Тірі объектілерді зерттеу - өмірлік (суправитальді) - жасушалар мен ұлпалардағы физиологиялық процестерді, олардың интравитальді құрылымын байқауға мүмкіндік береді. Сұйық ортада еркін суспензияланған жасушаларда (қан жасушалары, тырнақтардың эпителий жасушалары және т.б.), сондай-ақ арнайы қоректік орталарда өсірілген жасуша және ұлпа дақылдарында жүргізіледі. Интравитальді бақылау объектісі жұқа, мөлдір тіндік пленкалар (, жүзу мембранасы) болуы мүмкін. IN эксперименттік зерттеулербиологиялық терезелер әдісі қолданылады (мөлдір камераларды имплантациялау) және табиғи мөлдір ортада, мысалы, жануарлардың көзінің алдыңғы камерасында тіндік имплантацияларды зерттеу. Өмірлік зерттеулерде қойылған міндетке байланысты әртүрлі арнайы микроскопиялық әдістер қолданылады: қараңғы өріс, фазалық контраст, флуоресценция, поляризация, ультракүлгін. Витальды гистологиялық әдістер негізінен биологиялық және биомедициналық зерттеулер үшін қолданылады. Оларды кеңінен қолдану тірі қалған тіндердің қасиеттерімен байланысты үлкен техникалық қиындықтармен шектеледі. IN медициналық зерттеулер, әсіресе патологиялық-анатомиялық зертханалар тәжірибесінде қозғалмайтын объектілерді зерттеу әдістері қолданылады.

Бекітудің мақсаты - жасушалар мен ұлпалардың өлімнен кейінгі өзгерістердің дамуына кедергі келтіретін химиялық агенттерге тез әсер ету арқылы олардың ішілік құрылымын сақтау. Бекіту әдісін таңдау зерттеу мақсаттарына және бекітілетін материалдың сипаттамаларына байланысты. Осылайша, жұқа жасушалық құрылымдарды анықтау үшін құрамында ауыр металдардың тұздары бар фиксингтік қоспалар (мысалы, сублиматтар) қолданылады.Цитологиялық мақсаттар үшін ең жақсы фиксатор - электронды микроскопияда жиі қолданылатын осмий тетроксиді. Әмбебап бекіткіш формальдегид болып табылады, ол 10% формалин ерітіндісі түрінде қолданылады. Біркелкі және толық болу үшін ұлпа бөліктері шағын болуы керек, ал бекітетін сұйықтықтың көлемі бекітілетін материалдың көлемінен бірнеше есе көп болуы керек. Бекітуден кейін кесектерді әдетте сумен немесе алкогольмен жуады. Қатты тіндердің құрамдас бөліктері (мысалы, кальций шөгінділері) декальцификация әдістерінің көмегімен жойылады.

Ең жылдам және қарапайым түрдеӘдетте экспресс-диагностикада қолданылатын тіндік секцияны дайындау - бұл кесек және мұздатқыш микротомда тіндердің кесінділерін алу. Дегенмен, жеткілікті жұқа кесінділерді, сондай-ақ кішкентай заттардан және ыдырайтын тіндерден кесінділерді алу қиын. Сондықтан тіндердің бөліктері, әдетте, тығыздағыш ортаға - немесе целлоидинге құйылады. Бекітілгенді күші жоғарылататын спирттерде сусыздандырады, аралық еріткіштен (ксилол немесе парафин үшін, спирт-эфир целлоидин үшін) өткізеді және парафинмен немесе целлоидинмен сіңдіріледі. парафиндегі жұқа бөліктерді алуға мүмкіндік береді (5-8-ден 1-2-ге дейін). микрон) целлоидинге қарағанда. Микроскопиялық зерттеуге арналған секциялар слайдты немесе айналмалы микротомды пайдалана отырып дайындалады. Ультра жіңішке кесінділер (қалыңдығы 90-100-ден 5-15-ке дейін nm) электронды микроскопиялық зерттеулерге қажетті ультратомда дайындалады. Жартылай жіңішке кесінділерді алу үшін ультратомдар жарық микроскопиясында да қолданылады. Дайындалған кесінділер бояғыштарды басқаша қабылдайтын жасушалар мен ұлпалардың құрылымдарын айқын көрсету үшін боялады. Негізгі бояғыштар - бояғыш негіздер және олардың тұздары (, толуидин көк, көк, бисмарк қоңыр) - базофильді құрылымдар деп аталатындарды (жасуша ядролары, дәнекер тіндері) бояйды. Қышқылды бояғыштар – бояғыш қышқылдар және олардың тұздары (пикрин қышқылы, эритрозин) – ацидофильді, немесе оксифилді, құрылымдарды (жасуша цитоплазмасы, коллаген, эластикалық талшықтар) бояйды. бояуды сіңдіру арқылы ажырату керек - ауыр металдарды (мысалы, күміс, алтын, осмий) олардың тұздарынан қалпына келтіру және сол арқылы қарқынды түс алу үшін жасушалар мен тіндердің белгілі бір аймақтарына негізделген арнайы әдіс.

Гистологиялық препаратты дайындау объектінің құрылымдарын, оның түсі мен мөлдірлігін сақтауды қамтамасыз ететін орталарға салу арқылы аяқталады. Көбінесе органикалық шайырлар, мысалы, осы мақсаттар үшін қолданылады.

1. Шағын медициналық энциклопедия. - М.: Медициналық энциклопедия. 1991-96 жж 2. Алғашқы көмек. - М.: Ұлы орыс энциклопедиясы. 1994 3. энциклопедиялық сөздікмедициналық терминдер. - М.: Совет энциклопедиясы. - 1982-1984 жж.

Басқа сөздіктерде «Гистологиялық зерттеу әдістері» деген не екенін қараңыз:

Адам анатомиясындағы әдістемелік тәсілдер мен зерттеу әдістері– Кейде анатомияда, зерттеуде оқуға ешнәрсе қалмағанын естиді, барлық тақырыптар таусылды-мыс, зерттеуге болатынның бәрі зерттелді, барлық мәселелер шешілді. Адам денесінің құрылымына қатысты барлық нәрсе сияқты, ... ... Адам анатомиясы бойынша терминдер мен ұғымдардың глоссарийі

ЛАБОРАТОРИЯЛЫҚ ЗЕРТТЕУ- ЛАБОРАТОРИЯЛЫҚ ЗЕРТТЕУ. ЛАБОРАТОРИЯЛЫҚ ЗЕРТТЕУлерді қараңыз. Сенімді зерттеу нәтижелерін алудың ең маңызды шарты – талдау объектілерін дұрыс таңдау, оларды дер кезінде таңдау және зерттеу мәселесін тұжырымдау. Үлгі алу ережелері… Балық аурулары: анықтамалық

I Медицина Медицина – денсаулықты нығайтуға және сақтауға, адамдардың өмірін ұзартуға, адам ауруларының алдын алуға және емдеуге бағытталған ғылыми білім мен тәжірибе жүйесі. Осы міндеттерді орындау үшін М. құрылымын зерттейді және ... ... Медициналық энциклопедия

Микроскоптың көмегімен әртүрлі объектілерді зерттеу тәсілдері. Биология мен медицинада бұл әдістер өлшемдері адам көзінің рұқсатынан тыс болатын микроскопиялық объектілердің құрылымын зерттеуге мүмкіндік береді. М.м.и негізі. құрайды…… Медициналық энциклопедия

- (гистологиялық цитус жасушасы + грек логос ілімі) микроскоппен жасушалардың құрылымдық ерекшеліктерін зерттеуге негізделген, жасушалық құрамықалыпты және патологиялық процестердегі адам мен жануарлардың мүшелері, тіндері, дене сұйықтықтары. C. және....... Медициналық энциклопедия

I Гистология (грекше histos ұлпа + logos оқыту) медициналық биология ғылымы, ол көп жасушалы жануарлар мен адамдардағы ұлпалардың эволюциясын, олардың организмдегі дамуын (гистогенезін), құрылысын, қызметтерін және өзара әрекеттесуін зерттейді. Г.-ның негізгі зерттеу пәні ... ... Медициналық энциклопедия

I Vulva (vulva; pudendum femininum) әйелдің сыртқы жыныс мүшелері (Халықаралық анатомиялық номенклатура бойынша әйел жыныс мүшелерінің аймағы). Анатомия және физиология. Вульва (1-сурет) жамбастың жамбас сүйектерінің сыртында орналасқан және оларға бекітілген ... ... Медициналық энциклопедия

Ағзада әртүрлі ауру процестерінен болатын өзгерістерді зерттей отырып, ол өзіне тән зерттеу әдістерімен осы ауру процестерін және олардың ауру мен өлімнің клиникалық көрінісіне қатысты маңыздылығын анықтауды мақсат етеді ... ... Энциклопедиялық сөздік Ф.А. Брокхаус және И.А. Эфрон

I Биопсия (грекше биос өмір + опсис көру, визуалды қабылдау) диагностикалық мақсатта микроскопиялық зерттеу үшін тіндерді, мүшелерді немесе жасуша суспензияларын интравитальді алу, сондай-ақ патологиялық процестің динамикасын зерттеу және әсер ету ... ... Медициналық энциклопедия

Жануарлардың ұлпаларын зерттейтін ғылым. Ұлпа – пішіні, көлемі, қызметі және зат алмасу өнімдері бойынша ұқсас жасушалар тобы. Барлық өсімдіктер мен жануарларда, ең қарабайырларды қоспағанда, дене ұлпалардан тұрады, ... ... Collier энциклопедиясы

- (грек тілінен ἱστός ұлпа және грек тілінен λόγος білім, сөз, ғылым) тірі организмдердің ұлпаларының құрылысын зерттейтін биология саласы. Бұл әдетте тіндерді жұқа қабаттарға бөлу және микротомды қолдану арқылы жасалады. Анатомиядан айырмашылығы, ... ... Википедия

Кітаптар

• Көптеген миелома және плазмалық жасуша аурулары, Рамасами Картик, Лониал Сагар. Кітап көптеген миелома және басқа плазмалық жасушалар ауруларының негізгі клиникалық аспектілерін ұсынады. Зертханалық зерттеулер, патогенезі, диагностикасы және емі сипатталған. Екіншісінде…

Гистологиялық зерттеу әдістері. Қазіргі гистология әртүрлі зерттеу әдістерінің кең арсеналына ие. Бұл әдістердің барлығын арнайы құрылғы – микроскопты пайдалану талабы біріктіреді, сондықтан олардың барлығы микроскопиялық әдістер болып табылады.

Зерттелетін объектінің күйіне байланысты бұл әдістер тірі жасушалар, ұлпалар, мүшелер, тіпті тұтас организмдер зерттелетін кезде тірі (немесе суправиталды) және өлі қозғалмайтын объектілерді зерттегенде өмірден кейінгі болып бөлінеді.

Поствитальді әдіс немесе тұрақты гистологиялық препарат жасау әдісінің дамуы 19 ғасырдың екінші жартысында гистология ғылымының өзінің дамуымен қатар жүрді. Оны классикалық гистология әдісі деп те атайды. Гистологиялық немесе микроскопиялық әдіс деп аталатын бұл әдіс зерттеу объектісін біршама күрделі дайындауды талап етеді. Соңғысы арнайы, жеткілікті көлемді нұсқаулықтарды жазу тақырыбы болып табылады. Гистологияны зерттей бастаған студент осы препараттарды жақсы түсіну және талдауды, «оқуды» үйрену үшін гистологиялық препараттарды жасаудың негізгі әдістерімен таныс болуы керек, өйткені бұл тұрақты гистологиялық препараттар, олар екі ғылымда да кеңінен қолданылады. оқу процесісондай-ақ ғылыми зерттеулерде.

Препаратты өндірудің бірінші кезеңі материалды алу болып табылады. Қазірдің өзінде осы кезеңде, сондай-ақ кейінгі кезеңдердегідей, объектіге қажетсіз жарақаттанудан аулақ болу керек. Сондықтан органның немесе ұлпаның бір бөлігін кесу кезінде өткір қайшы немесе жүзді алу керек, тіндерді пинцетпен қыспау керек. Кесектер шағын өлшемдерде алынады - шамамен 1 см3 (жақсырақ 7x7x3 мм). Материал жаңа піскен және тәжірибелік жануарды сойғаннан немесе адам өлгеннен кейін мүмкіндігінше тезірек қабылдануы керек.

Келесі кезең - материалды бекіту, алынған бөлікті бекіту сұйықтықтарына батыру арқылы жүзеге асырылады. Бұл кезеңнің мақсаты - гистологиялық құрылымдар мен макромолекулаларды тірі объектіде болған орны мен күйінде бекіту. Әрине, фиксаторлар құрылымдардың интравитальді күйінде белгілі бір өзгерістерді тудырады, бірақ бұл өзгерістерді арнайы бекіту агенттерін таңдау арқылы азайтуға болады. Бекіткіштерге спирттер (этил, метил), формалин ерітінділері, ауыр металдардың тұздары, қышқылдар (сірке, пикрик, осмикалық) жатады. Көбінесе әртүрлі пропорцияда аталған компоненттерді қоса алғанда, әртүрлі күрделі бекітетін қоспалар қолданылады.

Үшінші кезең - бекітілген материалды сусыздандыру. Ол үшін 50-70-тен 100 градусқа дейін біртіндеп артып, әртүрлі концентрациядағы спирттерді қолданыңыз. Сусыздандыру келесі кезең үшін қажет - парафин, целлоидин, синтетикалық шайырларда жүзеге асырылатын объектіні тығыздау. Бұл заттардың басым көпшілігі сумен араласпайды, сондықтан олармен материалды сіңдіру үшін матадан суды мұқият алып тастау керек, содан кейін оны ксилолмен (толуол, бензол), яғни затпен сіңдіреді. ол парафинді жақсы ерітеді, сонымен қатар 100 градустық этил спиртімен араласады. Объектіні 55-56°С температурада сұйық парафинмен сіңдіргеннен кейін қатайтылған күйде беріледі. бөлме температурасыарнайы қалыптарда парафинмен бірге. Осылайша парафинді блок алынады. Бұл процедура толтыру деп аталады. Жеделдетілген тығыздауға тіндердің бөліктерін құрғақ мұзбен (көмірқышқыл газы) немесе сұйық азотпен мұздату арқылы қол жеткізіледі, бірақ зерттелетін гистологиялық нысандардың құрылымы бұл жағдайда нашар сақталады.

Материалдың тығыздалуы одан жеңіл микроскопия үшін қолданылатын жұқа (қалыңдығы 5-7 мкм), пивтондық (0,5-1 мкм) кесінділер жасауға мүмкіндік береді, электронды микроскопия үшін ультра жіңішке кесінділер (0,05-0,2 мкм) қолданылады. Секциялау арнайы құрылғыларда - микротомдарда (жарық микроскопиясы үшін) және ультрамикротомдарда (электрондық микроскопия үшін) жүргізіледі. Жіңішке, жіңішке немесе ультра жіңішке кесінділер жарық сәулелеріне немесе электронды сәулелерге мөлдір және оларды тиісті микроскоптар астында зерттеуге мүмкіндік береді. Объектінің құрылымдық бөлшектерін ажырату үшін, олардың көпшілігінде табиғи контраст жоқ, алынған кесіндіні бояу керек (жарық микроскопында зерттеу үшін) немесе контрастты (электрондық микроскопия үшін).

Гистологияда препараттарды бояудың көптеген әдістері бар және зерттеу мақсатына байланысты көптеген әртүрлі бояулар қолданылады. Гистологиялық бояғыштар шығу тегі бойынша өсімдік, жануар және синтетикалық (анилин) болып бөлінеді. Өсімдік бояуларының мысалы ретінде Орталық Америкада өсетін ағаш ағашының қабығынан алынатын гематоксилин және жәндіктерден алынатын жануарлар кармині – кохинеалды айтуға болады. Бояғыштардың басым көпшілігі синтетикалық - эозин, күлгін, лағыл және т.б.

Ең маңыздысы - гистологиялық дақтардың жіктелуі химиялық қасиеттері, өйткені ол курс барысында кездесетін бірқатар ұғымдар мен терминдерге негізделген. Сонымен, химиялық қасиеттері бойынша гистологиялық бояғыштар қышқылдық, негіздік және бейтарап болып бөлінеді. Қышқылды бояғыштардың қасиеттерін -COOH, -HS03, -H2P03 топтары анықтайды, бұлар анионды бояғыштар деп аталады. Қышқылды бояулар жасушаның цитоплазмасын бояйды, оларды цитоплазмалық деп атайды. Мұндай бояғыштардың мысалдары эозин (ашық қызғылт түс береді), ашық жасыл (береді жасыл түс). Қышқыл бояғыштармен бояуға болатын гистологиялық құрылымдар оксифилді (ацидофильді, эозинофильді) деп аталады. Бұл, мысалы, эозинофильді лейкоциттердің цитоплазмалық түйіршіктері, коллаген талшықтары және т.б.

Негізгі бояғыштар катиондық болып табылады, олардың басым көпшілігі молекуласының құрамында оң зарядталған азот атомдары болуы керек. Бұл бояғыштар жасушалардың ядроларын таңдамалы түрде бояйды, сондықтан оларды ядролық деп атайды. Мысал ретінде гематоксилин (көк-күлгін түстер), кармин (ашық қызыл), сафранин (қою қызыл), көкшіл II (көк) жатады. Негізгі бояғыштармен бояуға болатын гистологиялық құрылымдар базофильді деп аталады. Бұл базофильді лейкоциттердің цитоплазмасындағы түйіршіктер, жасуша ядролары және т.б.

Хабарлама жағдайында бейтарап бояулар түзіледі сулы ерітінділерқышқыл және негіздік бояғыштар, мысалы, эозин қышқылы метилен көк. Сонымен қатар, ерітіндіде негізгі және қышқыл бояғыштар бір уақытта болған кезде бейтарап бояғыш қоспаларды ажырату керек. Негізгі және қышқыл бояғыштарды бір уақытта қабылдайтын құрылымдар нейтропрофилдер немесе полихроматофильдер деп аталады. Мысал ретінде нейтрофильді лейкоциттердің түйіршіктері, полихроматофильді эритробласттардың цитоплазмасы және т.б.Гистологиялық құрылымдардың негізгі бояудың түсін өзгерту қабілеті метахромазия терминімен белгіленеді. Метахроматикалық бояу базофильді лейкоциттердің түйіршіктілігін, шеміршек тінінің жасушааралық затын және т.б. Дәрілерді әдетте бір қышқылды және бір негізді бояуды біріктіру арқылы бояйды, бұл ядроны, цитоплазманы және барлық базофилді және оксифилді құрылымдарды анықтауға мүмкіндік береді. Ең жиі біріктірілген бояғыштардың бірі - гематоксилин мен эозин.

Қышқыл, негіздік және бейтарап бояғыштардан басқа, белгілі бір заттарды немесе құрылымдарды анықтау үшін қолданылатын арнайы заттар бар. Мысалы, Судан III майлы заттарды сарғыш, ал орцеин серпімді талшықтарды қоңыр түске бояйды.

Түсті препараттар әдетте спирттерде сусыздандырылады, ксилолда тазартылады және канадалық бальзамның жұқа қабатымен жабылады, жабынмен жабылады. Бальзам құрғағаннан кейін ұзақ уақыт бойы қолдануға болатын тұрақты препарат алынады. Электрондық микроскопия үшін ультрамикротомдарда алынған кесінділерді уран немесе қорғасын тұздарымен контраст етіп, арнайы торларға орналастырады, микроскоп арқылы қарап, суретке түсіреді. Алынған микрофотографиялар гистологиялық препараттармен бір мезгілде зерттеу объектісі болып табылады.

Сипатталған жұқа кесінділерден басқа, гистологиялық препараттардың басқа түрлері бар, олар әлдеқайда сирек қолданылады, тек кейбір жағдайларда. Оларға жағындылар (қан, сүйек кемігі, сілекей және т.б.), іздер (бауыр, тимус, қуықтың шырышты қабаты), қабықшалар (дәнекер тін, плевра, перитонеум, пиа матер), жалпы препараттар (эмбриондардың ерте дамуы, жыныс жасушалары) .

Жасушаларды немесе ұлпаларды зерттеудің тірі (өмір бойы) әдістері оларда өмірлік процестердің қалай жүретіні туралы ақпарат алуға, жасушалардың қозғалысын, бөлінуін, өсуін, өзара әрекеттесуін, олардың әртүрлі факторлардың әсеріне реакциясын бақылауға мүмкіндік береді. Классикалық гистология әдісімен жасушалар мен ұлпалардың құрылымы туралы алынған мәліметтерге қажетті қосымша болып интравитальді зерттеу әдістері табылады. Интравитальді зерттеулер тірі организмде, яғни in vivo жүргізіледі. Тірі жасушаларды зерттеу үшін құттықтау және суправиталды бояу әдістері қолданылады. Ол үшін тірі тіндерге улы емес арнайы бояғыштарды қолданыңыз. Құттықтау бояуымен бояғыш тірі жануардың денесіне енгізіледі және ол белгілі бір жасушаларды таңдап бояйды. Макрофагтар жүйесінің жасушалары трипан көк немесе литий карминді енгізу жағдайында осылайша зерттеледі. Суправитальді-боялмаған - бұл организмнен оқшауланған тірі жасушалардың бояуы. Осылайша лизосомалар (бейтарап қызыл бояу), митохондриялар (Жанус жасыл), қанның ретикулоциттері (бриллиант-крезил көк) анықталады.

Құттықтау немесе суправитальді, сондай-ақ поствитальді зерттеулер үшін боялмаған гистологиялық объектілер жарық микроскопиясының бірқатар арнайы әдістерін пайдаланады - фазалық контраст, қараңғы өріс, флуоресценция.

Фазалық контраст әдісі конденсаторға орналастырылған арнайы сақиналы диафрагманың және объективте қамтылған фазалық пластинаның арқасында зерттелген боялмаған құрылымдардың қажетті контрастын қамтамасыз етеді. Жарық микроскопының оптикасының бұл дизайны объект арқылы өтетін жарықтың фазалық өзгерістерін амплитудалық өзгерістерге түрлендіруге мүмкіндік береді, бұл көз оны жарықтық өзгерістері ретінде байқайды.

Гистология(грек тілінен histes – мата және logos – ілім) аудармада «тіндер туралы ғылым» дегенді білдіреді. Алайда мұндай анықтама бұл ғылымның аясын тарылтады, өйткені гистологиялық әдісұлпаларды ғана емес, жасушалар мен мүшелердің жұқа құрылымын да зерттейді. Сонымен қатар, гистологияның міндеті - жасушалар мен ұлпалардың эволюциясын, олардың организмдегі қалыптасуы мен дамуын, жасушалардың, ұлпалардың, мүшелердің және жасушааралық заттардың қызметін зерттеу, тіндердің регенерациясын зерттеу, олардың құрылымдық құрылымын қамтамасыз ету. және функционалдық тұтастық.

Осыған байланысты гистология әдетте үш бөлімге бөлінеді: цитология, жалпы гистология және жеке гистология (микроскопиялық анатомия). Өздеріңіз білетіндей, цитология - бұл жасуша туралы ғылым - тірі материяның құрылымы, қызметі және шығу тегі туралы элементарлы бірлік. Жалпы гистологияның міндеті – ұлпалардың құрылысын, дамуын, қызметін және шығу тегін зерттеу. Жеке гистология – мүшелердің микроскопиялық және ультрамикроскопиялық құрылымын зерттейтін ғылым. Айта кету керек, гистологияның жоғарыда аталған бөлімдерге бөлінуі жасанды, өйткені жасушалар ұлпаларды құрайды, ұлпалар органдардың бір бөлігі, ал органдар ағзаны құрайды.

Демек, жасушалар, ұлпалар мен мүшелер тұтас организмнің бөліктері болып табылады. Сыртқы ортамен бірлікте организм ғана тұтастыққа ие, ал жасушалар, ұлпалар мен мүшелер бағынышты маңызға ие. Дегенмен, гистологияны бөлімдерге бөлуге шыдауға тура келеді. Бұл, ең алдымен, материалды ұсынуға ыңғайлы болу үшін қажет. Сонымен қатар, бөлімдердің әрқайсысы белгілі бір мәселелерді шешуге арналған.

Гистология онсыз дами алмайды тығыз байланысбасқа биологиялық пәндермен: анатомия, физиология, генетика және т.б. Сонымен қатар, гистология химия және физикамен де байланысты, өйткені гистологиялық зерттеулер физикалық-химиялық зерттеу әдістерін, әртүрлі химиялық заттар(фиксаторлар, бояғыштар) және физикалық аспаптар (микроскоптар, микротомдар және т.б.).

Гистологияны зерттеудің негізгі әдісі микроскопиялық болып табылады, ол объектілерді арнайы дайындаудан және оларды микроскоппен зерттеуден тұрады. Дайындау нысанды бір немесе басқа бояумен бекітіп, бояудан және микроскоп астында кейіннен зерттей отырып, жұқа кесінділерді жасаудан тұрады. Сондай-ақ тірі препараттарда гистологиялық объектілердің жұқа құрылымын зерттеуге болады. Алайда объектіні тірі күйде зерттеу өте қиын. Біріншіден, өтетін жарықтағы гистологиялық құрылымдар түссіз және микроскопта дерлік ажыратылмайды, екіншіден, олардың үлкен өлшемдері микроскоппен зерттеуге кедергі келтіреді. Мұның бәрі қозғалмайтын объектілерді зерттеуді қажет етеді, яғни. оның құрылымын сақтайтын әртүрлі заттармен өңделген өлі жасушалар және Химиялық құрамы. Бұл әдістердің әрқайсысының өзіндік артықшылықтары мен кемшіліктері бар, бұл олардың екеуін де толықтырушы ретінде пайдалану қажеттілігін көрсетеді.

Қазіргі заманғы технологиягистологиялық құрылымдарды тірі формада зерттеуге кең мүмкіндіктер ашады. Тірі объектілерде зерттеледі физикалық қасиеттеріжәне жасушалардың химиялық құрамы. Микроманипулятордың көмегімен жасушаларға әртүрлі операцияларды жүргізуге болады (жасуша ішілік құрылымдарды жою, ядроны бір жасушадан екінші жасушаға ауыстыру және т.б.).

Гистологиядағы зерттеу әдістерігистологиялық препараттарды дайындауды және оларды жарық немесе электронды микроскоптардың көмегімен зерттеуді қамтиды. Гистологиялық препараттар - бұл немесе басқа бояғышпен боялған (нағыз боялмаған кесінділер де зерттеледі) жағындылар, мүшелердің ізі, пленка препараттары, мүше бөліктерінің жұқа кесінділері, шыны слайдқа орналастырылған, бальзаммен жабылған және жұқа қабықпен жабылған. .

өндіру үшін гистологиялық дайындықматериалды алғаннан кейін оны бір немесе басқа фиксаторда бекіту керек (формалин, спирт, ал электронды микроскопия үшін - глутаральдегид пен осмий тетроксиді). Бұл автолиз процестерінің алдын алу және өмірге жақын органның құрылымын сақтау үшін жасалады. Одан кейін жіңішке кесінділерді жасауға қажетті ұлпаларды нығыздау үшін жоғары концентрациядағы спирттерде және ксилолда органның бір бөлігін сусыздандыру кезеңдері өтеді. Органның бір бөлігін жоғары сапалы кесуді қамтамасыз ететін одан да үлкен тығыздық пен біртектілік беру үшін оны органикалық ортаға - парафинге, целлоидинге (жарық микроскопия үшін) және органикалық шайырларға (эпон, аралдит, дуркупан) - электронды микроскопиялық үшін құйылады. емтихан.

Физикалық түрлері де бар материалды бекіту тәсілдері, оның ішінде ең көп тарағаны – сұйық азотты және басқа құралдарды қолдану арқылы мүшенің бір бөлігін жылдам мұздату. Мұздатылған материалды кесу үшін арнайы құрылғылар қолданылады - криостаттар немесе мұздатқыш микротомдар.

Жарықтандыруға арналған бөлімдердің қалыңдығы микроскопия, 4-5 микроннан аспауы керек, электронды үшін - 50-60 нм (мұндай ультра жұқа секциялар шыны немесе алмас пышақтарды және автоматты кесу режимін пайдалану арқылы арнайы ультратомдық құрылғыда жасалады).

Кесуді алғаннан кейінолар шыны слайдтарға орналастырылады, содан кейін кесінділерді кірістіру ортасынан (жарық микроскопиясымен) босату және кесінділерге контраст беру үшін бояу қадамдары орындалады. Гистологиялық дақтардың ішінде ядроны (қышқылды молекулаларды) белгілейтін гематоксилин мен іріктеп бояйтын эозиннің жиі қолданылатын комбинациясы. ақуыз молекулалары(цитоплазмалық бояу).

Бояудан кейін бөлімдерконсерванттарға (канадалық, балқарағай бальзамдары) салып, жабынмен жабылады.

Гистологиялық зерттеудің негізгі әдісіжасушалар, ұлпалар мен мүшелер – жарық микроскопиясы. Жарық микроскопы объектіні жарықтандыру үшін көрінетін жарықты пайдаланады. Заманауи жарық микроскоптары 0,2 мкм ретті ажыратымдылықты алуға мүмкіндік береді (микроскоптың ажыратымдылығы - екі көрші нүкте бөлек көрінетін ең аз қашықтық). Жарық микроскопиясының түрлері – фазалық-контрасты, интерференциялық, поляризациялық, күңгірт-өріс және т.б.

Фазалық контрастты микроскопия- фазалық контрастты құрылғымен жабдықталған жарық микроскопында жасушаларды зерттеу әдісі. Осы конструкциядағы микроскоптағы жарық толқындарының фазалық ығысуына байланысты зерттелетін объект құрылымдарының контрасттылығы артады, бұл тірі жасушаларды зерттеуге мүмкіндік береді.

интерференциялық микроскопия. Интерференциялық микроскопта объектіге түскен жарық шоқтары екіге бөлінеді – бір сәуле нысан арқылы өтеді, екіншісі өтіп кетеді. Арқалықтардың кейінгі қайта қосылуымен объектінің интерференциялық бейнесі пайда болады. Бір сәуленің екіншісіне қатысты фазалық ығысуы бойынша зерттелетін объекттегі әртүрлі заттардың концентрациясын анықтауға болады.

Поляризациялық микроскопия. Осы типтегі микроскоптарда жарық шоғы өзара перпендикуляр жазықтықта поляризацияланған екі сәулеге ыдырайды. Молекулалардың қатаң бағдары бар тіндік құрылымдар арқылы өтіп, сәулелер олардың тең емес сынуына байланысты бір-біріне қатысты артта қалады. Алынған фазалық ығысу жасушалық құрылымдардың қос сынуының көрсеткіші болып табылады (осылайша, мысалы, миофибрилдер зерттелді).